한약 전탕방법 변해야 한다(7)
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한약 전탕방법 변해야 한다(7)
  • 승인 2004.04.19 15:05
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권 영 민 (대구 영지한의원 원장)

3. 한약의 표준화 어떻게 할 것인가

2) 한약액의 표준화방법

(1) 정량분석과 정성분석 (지난 호 게재)

(2) 동물실험과 임상실험

한약액 표준화의 한 방법으로 동물 및 임상실험론 또한 중요한 부문이라고 생각되어 자세히 소개하고자 한다.
다음은 Medicap-M15를 이용하여 다른 전탕기와의 효능을 비교한 논문으로, 실험은 대구한의대 본초학교실에서 하였다.

① 연구목적(필요성)

(주)메디캡에서 개발한 Medicap-M15는 재래식 전탕방식을 과학으로 완성하여 최첨단화한 한약 전탕기로 기존의 전탕기로 3~4시간이나 소요되던 전탕시간을 획기적으로 단축한 제품으로, 약 30분만에 한약의 전탕이 가능하게 되었다.
시간 단축에 따른 전탕의 성분에 대하여 동물을 이용한 약리실험은 아직 거치지 못한 바, 약효의 증명을 확인하기 위해 이미 성분이 검증된 바 있는 처방중의 하나인 五積散으로 약효실험을 하게 되었다.

② 연구내용, 범위 및 방법

㈀ 연구 개발 내용 및 범위
Medicap-M15로 추출한 五積散의 효능을 연구하기 위해 압력식 약탕기와 무압력식 약탕기를 이용한 五積散 추출물도 같이 비교 대상으로 설정하여 실험에 이용하였다. 五積散의 추출물을 이용하여 鎭痛, 關節炎 및 瘀血, 消炎에 미치는 영향을 분석하였다.

㈁ 연구 개발방법

□ 검액의 조제
五積散은 물 추출하였으며, 五積散 處方의 試料는 제약회사에서 구입하여 전문가의 검증을 거친 것을 압력식 추출기와 무압력식 추출기 및 Medicap-M15에서 추출하여 이용하였다. 압력식과 무압력식추출에서는 3시간 가열하여 추출한 용액을 이용하였으며, Medicap-M15에서는 30분 동안 가열하여 추출한 물 추출액을 실험에 이용하였다.

□ 鎭痛作用

㉠ 醋酸法에 의한 鎭痛實驗
高木 등의 방법에 의하여 측정하였다. 생쥐를 1군에 8마리로 하여 정상군, 대조군, 압력식 오적산 추출군, 무압력식 오적산 추출군, Medicap-M15 오적산 추출군으로 구분한 다음, 검액을 sonde를 이용하여 경구로 투여하고 30분후 0.7%의 초산 0.1㎖/10g을 복강내 주사한 다음, 주사 10분후 부터 10분간의 Writhing syndrome의 回數를 計測하였다.

{(정상 대조군의 빈도수 - 약물투여군의 빈도수) / 정상대조군의 빈도수} × 100 = 鎭痛治癒率(%)

㉡ Acetylcholine writhing法
생쥐를 1군에 8마리로 하여 정상군, 대조군, 압력식 오적산 추출군, 무압력식 오적산 추출군, Medicap-M15 오적산 추출군으로 구분한 다음, 검액을 경구 투여하고, 30분후 Acetylcholine HCl 5㎎/㎏를 복강내 주사한 다음, 즉시 10분간의 writhing 회수를 계측하였다.

□ 關節炎 實驗

㉠ 관절염의 유발 : 關節炎의 유발은 高木 등의 방법에 의하여 freund’s complete adjuvant 시약(FCA ; Dico) 0.05㎖(혹은 0.1㎖/rat)를 白鼠의 右側 足蹠에 注入하고 2주 경과한 다음, 관절염이 유발되는 것을 확인하였다.

㉡ 검액의 투여 : 검액의 투여는 약 180-200g의 흰쥐 8마리를 5군으로 나누어 全期間동안 생리식염수만을 투여한 정상군(Normal group), FCA를 주사하고 2주 후에 생리식염수를 투여한 대조군(Control group), FCA를 주사하고 2주 후 압력식 오적산 추출물 투여군, FCA를 주사하고 2주 후 무압력식 오적산 추출물 투여군, FCA를 주사하고 2주 후 Medicap-M15 오적산 추출물 투여군으로 구분하였다. 오적산 추출물의 투여 용량과 기간은 각각의 전탕액 500㎎/㎏을 1주간 투여하였다.

㉢ 채혈 및 혈청의 분리 : 동물을 이산화탄소로 가볍게 마취한 후, 복부 정중선을 따라 開腹하고 복부 대동맥에서 혈액을 채취한 全血의 일정량을 CBC bottle에 넣고 나머지 혈액은 실온에서 30분간 방치하여 응고시킨 후, 원심분리기로 600xg에서 15분간 원심분리하여 혈청을 분리시켜 실험에 사용하였다.

㉢ leucocyte의 측정 : leucocyte의 측정은 Fonio법에 준하여 Sysmex K-1000 Cell-Counter(日本)를 사용하였다.

㉣ 총단백 함량 측정 : 혈청중의 총단백 함량은 Biuret 등의 방법에 준하여 총단백 측정용 시약(Sigma)을 사용하여 측정하였다.

㉤ 浮腫 測定 : plethysmometer를 이용하여 격일 간격으로 15일 동안 측정 하였다.

□ 血栓에 미치는 영향

㉠ Hydrocortisone acetate 투여 : 정상군은 생리식염수를 2㎖를 투여하였고, 대조군은 생리식염수를 2㎖ 경구투여한 후 이어서 hydrocortisone acetate 5㎎/200g을 1일 1회 1주간 둔부근육 주사하였으며, 실험군 에서는 hydrocortisone acetate 주사 1시간 후에 각 실험약물의 물 추출액 농출액을 2㎖씩을 1일 1회 1주일간 경구투여 하였다.

㉡ 採血 및 血漿分離 : hydrocortisone acetate를 최종 투여한 24시간 후 ether로 가볍게 마취시키고 심장에서 채혈하였으며, 항응고제인 EDTA-2K가 담긴 작은 용기를 사용하여 3,000rpm에서 15분간 원심분리시켜 혈장을 얻었다.

㉢ 혈소판수 측정 : 혈소판수 측정은 Fonio법에 의하여 하였다.

㉣ Fibrinogen 量 측정 : 혈장내의 피브리노겐은 Fibrinogen test set(國際商事, Japan)을 사용하여 측정하였다.

㉤ Prothrombin time 측정 : Prothrombin time은 Simplastin kit(General Diagnostics, USA)를 사용하여 측정하였다.

㉥ Hematocrit値 측정 : Hematocrit値를 측정하였다.

□ 消炎作用
흰쥐를 1군에 8마리로 하여 검액을 경구투여하고, 30분후에 5% 초산생리식염액의 0.1㎖/rat를 左後肢足蹠에 피하주사하여 부종을 야기시킨 다음, 高木등의 방법에 따라서 4시간 동안 經時的으로 plethysmometer를 이용하여 족용적을 측정하여 起炎劑 주사전의 치에서부터 부종률을 측정하여 대조군의 부종률과 비교하여 억제률을 구하였다.
부종증가률 및 부종억제률은 다음 식으로 산출하였다.

{(Vt - Vs) / Vs} × 100 = 부종증가율(%)
{(Ec - Es) / Es} × 100 = 부종억제율(%)

Vt = 起炎劑를 足蹠皮下 注射前의 足의 容積
Vs = 起炎劑를 足蹠皮下 注射後의 足의 容積
Ec = 對照群의 평균 浮腫率
Es = 藥物投與後의 平均 浮腫率

□ 통계
각 群間의 실험결과 분석은 Student’s t-test를 하여 유의성(p<0.1수준)을 검증하였다. <계속>

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